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    技術文章

    小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養方法

    更新更新時間:2019-12-27 瀏覽次數:2769

    平滑肌即無紋肌的通稱,平滑肌是由長紡錘形的單核細胞構成。它不構成獨立的器官,而只是成為構成體壁和內臟壁的因素(肌層)。平滑肌細胞互相連接,形成管狀結構或中空器官;在功能上可以通過縮短和產生張力使器官發生運動和變形,也可產生連續收縮或緊張性收縮,使器官對抗所加負荷而保持原有的形狀。

    小鼠支氣管平滑肌細胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過程有關.如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發病時,可以檢測到氣管平滑肌發生數目的增生和肥大,表型也發生改變,由收縮型轉為合成型與分泌型,并分泌多種與細胞因子;而且出現向氣管腔遷移的跡象。

     

    小鼠支氣管平滑肌細胞來源于實驗動物正常支氣管組織長梭狀細胞,貼壁培養。通過平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色鑒定為陽性鑒定純度高于90%不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

    1.試驗所需儀器設備及試劑

    (1)儀器

    儀器名稱

    規格型號

    廠家

    生物安全柜

    BSC-1500ⅡA2-X

    濟南鑫貝西生物技術有限公司

    CO2細胞培養箱

    BC-J160S

    上海博迅實業有限公司

    熒光倒置顯微鏡

    DS-Ri2

    Nikon

    高速冷凍離心機

    Multifuge X1R

    Thermo Fisher

    電熱恒溫鼓風干燥箱

    DHG-9123A

    上海精宏實驗設備有限公司

    (2)試劑耗材

    試劑名稱

    規格/貨號

    廠家

    T25細胞培養瓶

    430639

    Coming

    血球計數板

    Neubauer improved

    Marienfeld

    細胞培養孔板

    WHB-24

    上海臥宏生物科技有限公司

    平滑肌細胞*培養基

    PriMed-iCell-004

    鏡像綺點(上海)細胞技術有限公司

    0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA)

    1734858

    Gibico

     

    2.小鼠支氣管平滑肌細胞的分離培養

    1) 取4-5周齡的小鼠,斷頸處死后,泡于75%的酒精中,

    2) 剖開胸腔,取出完整氣管及肺組織,放入無菌PBS中,

    3) 在體視顯微鏡下,小心分離出下游支氣管,

    4) 用眼科剪及鑷子分離肌層并剪碎,

    5) 加入0.1% I + II + IV + dispase,4℃過夜消化,

    6) 第二天置于37℃水浴搖床中消化2~3h,

    7) 待液體變渾濁后加入*培養基終止消化,充分吹打,

    8) 過100目篩網,收集濾液,1000rpm離心5min,棄去上清,

    9) 用*培養基重懸沉淀,鋪瓶。

    除了上述的細胞分離方法以外,鏡像綺點還有很多關于其他細胞的分離方法,想要學習的小伙伴可以來鏡像綺點進行現場學習,如果想要其他原代分離培養方法,可在購買相應的細胞過程中,贈送該細胞的分離方法及培養條件,想要了解更多,打電話或咨詢相關工作人員。

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