你知道人胚腎細胞293T是怎么培育出來的嗎？

　　人胚腎細胞293T的培養需要準備DMEM-H培養基，90%；優質胎牛血清，10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養基，使293T細胞懸浮生長。

　　1、培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

　　2、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

　　3、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過）。第二天換液并檢查細胞密度。

　　4、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　如果在人胚腎細胞293T培養過程中出現貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

　　3、按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

　　4、將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

　　5、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

　　在人胚腎細胞293T培養過程中，需要注意以下兩個事項：

　　1.收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

　　2.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。