說說小鼠小膠質(zhì)BV2的傳代方法和凍存方法

　　小鼠小膠質(zhì)BV2是一個(gè)不斷增長和分化的細(xì)胞群。由于其遺傳轉(zhuǎn)化，它具有無限的生長潛力。體外培養(yǎng)的細(xì)胞系用于醫(yī)學(xué)或科學(xué)研究。事實(shí)上，連續(xù)細(xì)胞系可以在大量培養(yǎng)基中培養(yǎng)。隨著代數(shù)的增加，細(xì)胞的基因型和表型可能會發(fā)生變化。保證細(xì)胞純度在90%以上，并通過微生物檢測，確保不含HIV、HBV、HCV、支原體、真菌等各類細(xì)菌。

　　如果懸浮物來自血液、羊水、胸水或腹水，簡單的方法是用1000r/min低速離心10分鐘。如果懸浮液體積較大，可適當(dāng)延長離心時(shí)間，但速度不宜過高，延遲不宜過長，以免擠壓或?qū)?xì)胞造成機(jī)械損傷。離心沉淀后，用無鈣無鎂PBS洗2次，培養(yǎng)基洗1次，調(diào)整合適的細(xì)胞濃度后，裝瓶培養(yǎng)。如果選擇懸浮液中的一些細(xì)胞，通常使用離心后的細(xì)胞分層液，因?yàn)橛捎诟鞣N細(xì)胞的比重不同，在離心后的分層液中可以形成不同的層，從而可以收獲靶細(xì)胞作為需要。

　　

　　一、小鼠小膠質(zhì)BV2傳代方法：

　　1、輕輕吸去培養(yǎng)上清液，留下2-3ml培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞表面，吹掉細(xì)胞；

　　2、混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5分鐘，棄上清；

　　3、加入新的培養(yǎng)基，輕輕重懸細(xì)胞，均勻分布到新的培養(yǎng)瓶中；

　　4、補(bǔ)充完整培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱進(jìn)行靜態(tài)培養(yǎng)。

 

　　二、小鼠小膠質(zhì)BV2凍存方法：

　　1、離心得到細(xì)胞沉淀后，加入配置好的凍存液，輕輕重懸細(xì)胞；

　　2、盡快將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的凍存管中；

　　3、將凍存管轉(zhuǎn)移到程序凍存箱中，放入-80℃冰箱過夜，次日轉(zhuǎn)移到液氮中保存；如果沒有凍存實(shí)驗(yàn)室，可以在加入細(xì)胞后5-10分鐘將細(xì)胞置于4度的泡沫箱中。然后-20在2h保存，然后轉(zhuǎn)移到-80度過夜。第二天轉(zhuǎn)移到液氮中保存。